ຊຸດກວດຫາອາຊິດນິວຄລີອິກ Coronavirus(SARS-Cov-2) ໃໝ່
New Cໂອໂຣnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluແຮ່scent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】ໃໝ່ Coronavirus(SARS-Cov-2) ຊຸດກວດຫາອາຊິດນິວຄລີອິກ(ວິທີການສຳຫຼວດ RT-PCR fluorescent)
【Packaging specifications 】25 ການທົດສອບ / ຊຸດ
【Intended usອາຍຸ】
ຊຸດນີ້ແມ່ນໃຊ້ສໍາລັບການກວດສອບຄຸນນະພາບຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກຈາກໂຣກ coronavirus ໃຫມ່ໃນ swabs nasopharyngeal, oropharyngeal (ຄໍ) swabs, swabs ດັງດ້ານຫນ້າ, swabs ກາງ turbinate, ລ້າງດັງແລະ nasal aspirates ຈາກບຸກຄົນທີ່ສົງໃສວ່າເປັນ COVID19 ໂດຍຜູ້ໃຫ້ບໍລິການດ້ານສຸຂະພາບຂອງເຂົາເຈົ້າ. ການກວດຫາພັນທຸກໍາຂອງ ORF1ab ແລະ N ຂອງໂຣກ coronavirus ຊະນິດໃຫມ່ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການບົ່ງມະຕິຊ່ວຍແລະການຕິດຕາມການລະບາດຂອງການຕິດເຊື້ອໂຣກ coronavirus ໃຫມ່.
【Principles of the procedure 】
ຊຸດນີ້ຖືກອອກແບບມາສໍາລັບການສືບສວນ TaqMan ສະເພາະແລະ primers ສະເພາະທີ່ຖືກອອກແບບມາສໍາລັບລໍາດັບເຊື້ອໂຣກ coronavirus ໃຫມ່ (SARS-Cov-2) ORF1ab ແລະ N. ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ PCR ມີ 3 ຊຸດຂອງ primers ສະເພາະແລະ fluorescent probes ສໍາລັບການກວດຫາເປົ້າຫມາຍສະເພາະ, ແລະຊຸດເພີ່ມເຕີມຂອງ primers ສະເພາະແລະ fluorescent probes ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມມາດຕະຖານພາຍໃນຂອງຊຸດສໍາລັບການກວດຫາພັນທຸກໍາຂອງ endogenous.
ຫຼັກການຂອງການທົດສອບແມ່ນວ່າ probe fluorescent ສະເພາະໄດ້ຖືກຍ່ອຍສະຫຼາຍແລະ degraded ໂດຍກິດຈະກໍາ exonuclease ຂອງ enzyme Taq ໃນປະຕິກິລິຍາ PCR, ດັ່ງນັ້ນກຸ່ມ fluorescent ນັກຂ່າວແລະກຸ່ມ fluorescent quenched ຖືກແຍກອອກ, ດັ່ງນັ້ນລະບົບຕິດຕາມກວດກາ fluorescence ສາມາດໄດ້ຮັບ fluorescent. ສັນຍານ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໂດຍຜ່ານຜົນກະທົບຂອງການຂະຫຍາຍ PCR, ສັນຍານ fluorescence ຂອງ probe ໄດ້ບັນລຸເປົ້າຫມາຍທີ່ກໍານົດໄວ້ມູນຄ່າ Ct (ເກນຮອບວຽນ). ໃນກໍລະນີທີ່ບໍ່ມີ amplicon ເປົ້າຫມາຍ, ກຸ່ມນັກຂ່າວຂອງ probe ແມ່ນຢູ່ໃກ້ກັບກຸ່ມ quenching. ໃນເວລານີ້, ການໂອນພະລັງງານ resonance fluorescence ເກີດຂື້ນ, ແລະການ fluorescence ຂອງກຸ່ມນັກຂ່າວຖືກດັບໂດຍກຸ່ມ quenching, ດັ່ງນັ້ນບໍ່ສາມາດກວດພົບສັນຍານ fluorescent ໂດຍເຄື່ອງມື PCR fluorescent.
ໃນຄໍາສັ່ງທີ່ຈະຕິດຕາມກວດກາການນໍາໃຊ້ຂອງ reagents ໃນໄລຍະການທົດສອບ, ຊຸດໄດ້ຖືກຕິດຕັ້ງດ້ວຍການຄວບຄຸມໃນທາງບວກແລະທາງລົບ: ການຄວບຄຸມໃນທາງບວກປະກອບດ້ວຍສະຖານທີ່ເປົ້າຫມາຍ recombinant plasmid, ແລະການຄວບຄຸມທາງລົບແມ່ນນ້ໍາກັ່ນ, ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຕິດຕາມກວດກາມົນລະພິດສິ່ງແວດລ້ອມ. ມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ກໍານົດການຄວບຄຸມໃນທາງບວກແລະການຄວບຄຸມທາງລົບພ້ອມໆກັນໃນເວລາທີ່ການທົດສອບ.
【Main comປອນເອັນts 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | ສ່ວນປະກອບents | |
ນe | ສະເພາະການຢັ້ງຢືນ | ປະລິມານມັນ | ປະລິມານມັນ | |
ການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ | 180 μL / vial | 1 | 1 | plasmids ກໍ່ສ້າງທຽມ, ນ້ໍາກັ່ນ |
ການຄວບຄຸມທາງລົບ | 180 μL / vial | 1 | 1 | ນ້ຳກັ່ນ |
SARS-Cov-2 ປະສົມ | 358.5 μL / vial | 1 | / | ຄູ່ primer ສະເພາະ, ກວດຫາສະເພາະ fluorescent probes, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, ນ້ໍາກັ່ນ, ແລະອື່ນໆ |
Enzyme Mix | 16.5 μL / vial | 1 | / | enzymes taq, reverse transcriptase, enzymes UNG, ແລະອື່ນໆ. |
SARS-Cov-2 Mix(Lyophilised) | 25 ການທົດສອບ / vial | / | 1 | ຄູ່ primer ສະເພາະ, ການກວດສອບສະເພາະ fluorescent probes, dNTPs, enzymes Taq, reverse transcriptase, ນ້ໍາກັ່ນ, ແລະອື່ນໆ. |
2x Buffer | 375 μL / vial | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, ນ້ໍາກັ່ນ, ແລະອື່ນໆ. |
ຫມາຍເຫດ:(1) ອົງປະກອບໃນຊຸດ batch ທີ່ແຕກຕ່າງກັນບໍ່ສາມາດປະສົມຫຼືແລກປ່ຽນກັນໄດ້.
(2) ກະກຽມ reagent ຂອງທ່ານເອງ: ຊຸດສະກັດອາຊິດນິວຄລີອິກ.
【Storage condມັນons ແລະ expiration date 】
For BST-SARS-25:ການຂົນສົ່ງແລະເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ -20 ± 5 ℃ສໍາລັບເວລາດົນນານ.
For BST-SARS-DR-25:ການຂົນສົ່ງຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ. ເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ± 5 ℃ເປັນເວລາດົນນານ.
ຫຼີກລ້ຽງຮອບວຽນການແຊ່ແຂງຊ້ຳໆ. ໄລຍະເວລາທີ່ມີຄວາມຕ້ອງການແມ່ນກໍານົດໄວ້ເປັນ 12 ເດືອນ.
ເບິ່ງປ້າຍກຳກັບສຳລັບວັນທີຜະລິດ ແລະນຳໃຊ້.
ຫຼັງຈາກເປີດຄັ້ງທຳອິດ, ທາດຣີເອັດສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ± 5 ອົງສາເຊ ເປັນເວລາບໍ່ເກີນ 1 ເດືອນ ຫຼື ຈົນກວ່າຈະໝົດໄລຍະເວລາຂອງທາດປະຕິ, ກຳນົດມື້ໃດກ່ອນ, ເພື່ອຫຼີກລ່ຽງການແຊ່ແຂງຊ້ຳແລ້ວຊ້ຳອີກ, ແລະຈຳນວນການແຊ່ແຂງ. - thaw cycles ບໍ່ຄວນເກີນ 6 ເທື່ອ.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.ປະເພດຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້ໄດ້: ສານສະກັດຈາກອາຊິດນິວຄລີອິກ.
2.ການເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງແລະການຂົນສົ່ງ: ເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ 20 ± 5 ℃ສໍາລັບ 6 ເດືອນ.Freeze ແລະ thaw ຕົວຢ່າງບໍ່ເກີນ 6 ເທື່ອ.
【Testing metຮັອດ】
1.Nucleic acid extraction
ເລືອກຊຸດສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ເໝາະສົມເພື່ອສະກັດອາຊິດນິວຄລີອິກໄວຣັສ, ແລະປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຊຸດທີ່ສອດຄ້ອງກັນ. ຂໍແນະນຳໃຫ້ໃຊ້ຊຸດສະກັດ ແລະ ຊຳລະລ້າງອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ຜະລິດໂດຍບໍລິສັດ Yixin Bio-Tech (ກວາງໂຈວ) ຈຳກັດ ຫຼືຊຸດທຳຄວາມສະອາດອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ທຽບເທົ່າ.
2. Reaction reagent prepອາຣາtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) ເອົາເຄື່ອງປະສົມ SARS-Cov-2 ແລະ Enzyme Mix ອອກ, ເຮັດໃຫ້ລະລາຍຢ່າງສົມບູນໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງປະສົມຢ່າງລະອຽດໂດຍອຸປະກອນ Vortex ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ centrifuge ໄລຍະສັ້ນໆ.
(2) 16.5uL Enzyme Mix ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ 358.5uL SARS-Cov-2 Mix ແລະປະສົມຢ່າງລະອຽດເພື່ອໃຫ້ໄດ້ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາປະສົມ.
(3) ກະກຽມທໍ່ 0.2 mL PCR octal ທີ່ສະອາດແລະຫມາຍມັນດ້ວຍ 15uL ຂອງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາປະສົມຂ້າງເທິງຕໍ່ດີ.
(4) ຕື່ມ 15 μLຂອງການແກ້ໄຂອາຊິດ nucleic ບໍລິສຸດ, ການຄວບຄຸມທາງບວກແລະການຄວບຄຸມທາງລົບ, ແລະລະມັດລະວັງກວມເອົາຝາທໍ່ octal.
(5) ປົນກັນດີໂດຍການປີ້ນກັບຫົວ, ແລະໄວ centrifuge ເພື່ອສຸມໃສ່ຂອງແຫຼວຢູ່ລຸ່ມສຸດຂອງທໍ່.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) ຕື່ມ Buffer 375ul 2x ໃສ່ SARS-Cov-2 Mix((Lyophilised) ເພື່ອກະກຽມການປະສົມປະຕິກິລິຢາ, ປະສົມຢ່າງລະອຽດໂດຍການທໍ່ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ centrifuge ສັ້ນໆ. ການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວ)
(2) ກະກຽມທໍ່ 0.2 mL PCR octal ທີ່ສະອາດແລະຫມາຍມັນດ້ວຍ 15μL ຂອງປະຕິກິລິຍາປະສົມຕໍ່ດີ.
(3) ເພີ່ມ15μLຂອງການແກ້ໄຂອາຊິດ nucleic purified, ການຄວບຄຸມໃນທາງບວກແລະການຄວບຄຸມທາງລົບ, ແລະລະມັດລະວັງກວມເອົາຝາທໍ່ octal.
(4) ປົນກັນດີໂດຍການປີ້ນກັບຫົວ, ແລະໄວ centrifuge ເພື່ອສຸມໃສ່ຂອງແຫຼວຢູ່ລຸ່ມສຸດຂອງທໍ່.
3. PCR ampລີຟີcation (ກະລຸນາເບິ່ງຄູ່ມືເຄື່ອງມືສໍາລັບການຕັ້ງຄ່າການດໍາເນີນງານ.)
3. 1 ວາງ PCR 8-tube ເຂົ້າໄປໃນຫ້ອງຕົວຢ່າງຂອງເຄື່ອງມື fluorescent PCR, ແລະກໍານົດຕົວຢ່າງທີ່ຈະທົດສອບ, ການຄວບຄຸມໃນທາງບວກແລະທາງລົບຕາມຄໍາສັ່ງຂອງການໂຫຼດ.
3.2 ຊ່ອງທາງການກວດສອບ fluorescence:
(1) gene ORF1ab ເລືອກຊ່ອງທາງການກວດຫາ FAM (ນັກຂ່າວ: FAM, Quencher: ບໍ່ມີ).
(2) N gene ເລືອກຊ່ອງທາງການກວດພົບຂອງ VIC (ນັກຂ່າວ: VIC, Quencher: ບໍ່ມີ).
(3) gene ມາດຕະຖານພາຍໃນເລືອກຊ່ອງທາງການກວດພົບຂອງ CY5 (ນັກຂ່າວ: CY5, Quencher: ບໍ່ມີ).
(4) ການອ້າງອິງ Passive ຖືກຕັ້ງເປັນ ROX.
3.3 ການຕັ້ງຄ່າຕົວກໍານົດການໂຄງການ PCR:
ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ (℃) | ເວລາ | ຈໍານວນຮອບວຽນ | |
1 | ປະຕິກິລິຍາການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນ | 50 | 15 ນາທີ | 1 |
2 | ການກະຕຸ້ນ enzyme Taq | 95 | 2.5 ນທ | 1 |
3 | ການກະຕຸ້ນ enzyme Taq | 93 | 10 ວ | 43 |
ການຂະຫຍາຍການດູດຊືມແລະການໄດ້ຮັບ fluorescence | 55 | 30 ວ |
ຫຼັງຈາກການຕັ້ງຄ່າ, ບັນທຶກໄຟລ໌ແລະດໍາເນີນການໂຄງການຕິກິຣິຍາ..
4.Results analysis
ຫຼັງຈາກໂຄງການສິ້ນສຸດລົງ, ຜົນໄດ້ຮັບຈະຖືກບັນທຶກໂດຍອັດຕະໂນມັດ, ແລະເສັ້ນໂຄ້ງການຂະຫຍາຍໄດ້ຖືກວິເຄາະ. ເສັ້ນໂຄ້ງການຂະຫຍາຍແມ່ນຕັ້ງເປັນເກນມາດຕະຖານເຄື່ອງມື.
【Explanation of test results 】
1. ກໍານົດຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການທົດລອງ: FAM ຄວບຄຸມໃນທາງບວກ, ຊ່ອງທາງ VIC ຄວນມີເສັ້ນໂຄ້ງຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ, ແລະຄ່າ Ct ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນຫນ້ອຍກວ່າ 34, ແຕ່ອາດຈະມີຄວາມຜັນຜວນເນື່ອງຈາກການຕັ້ງຄ່າຂອບເຂດຂອງເຄື່ອງມືທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. FAM ການຄວບຄຸມທາງລົບ, ຊ່ອງທາງ VIC ຄວນຈະເປັນ Ct ທີ່ບໍ່ຂະຫຍາຍ. ມັນໄດ້ຖືກຕົກລົງເຫັນດີວ່າຄວາມຕ້ອງການຂ້າງເທິງນີ້ຕ້ອງໄດ້ຮັບການຕອບສະຫນອງໃນເວລາດຽວກັນ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນການທົດສອບນີ້ແມ່ນບໍ່ຖືກຕ້ອງ.
2. ຜົນການຕັດສິນ
ຊ່ອງ FAM/VIC | ຜົນການຕັດສິນ |
Ct 37 | ຕົວຢ່າງການທົດສອບແມ່ນເປັນບວກ |
37≤Ct<40 | ເສັ້ນໂຄ້ງຂະຫຍາຍເປັນຮູບ S, ແລະຕົວຢ່າງທີ່ສົງໃສຕ້ອງໄດ້ຮັບການກວດກາຄືນ; ຖ້າຜົນການກວດກາຄືນແມ່ນສອດຄ່ອງ, ມັນຈະຖືກຕັດສິນວ່າເປັນບວກ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະເປັນລົບ |
Ct≥40 ຫຼືບໍ່ມີການຂະຫຍາຍ | ຕົວຢ່າງການທົດສອບແມ່ນເປັນລົບ (ຫຼືຕໍ່າກວ່າຂອບເຂດຈໍາກັດຕ່ໍາຂອງການກວດຫາຊຸດ) |
ໝາຍເຫດ: (1) ຖ້າທັງຊ່ອງ FAM ແລະຊ່ອງ VIC ເປັນບວກໃນເວລາດຽວກັນ, SARS-Cov-2 ຖືກກໍານົດວ່າເປັນທາງບວກ.
(2) ຖ້າຊ່ອງ FAM ຫຼືຊ່ອງ VIC ເປັນບວກແລະຊ່ອງທາງອື່ນເປັນລົບ, ການທົດສອບຄວນໄດ້ຮັບການຊ້ໍາອີກ. ຖ້າມັນເປັນບວກໃນເວລາດຽວກັນ, ມັນຈະຖືກຕັດສິນວ່າເປັນ SARS-Cov-2 ໃນທາງບວກ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະຖືກຕັດສິນເປັນ SARS-Cov-2 ລົບ.